色譜柱和更小粒徑的優(yōu)勢之一是可以在很高的線(xiàn)性速度操作,不會(huì )損失系統柱效。分析過(guò)程可以通過(guò)增加流速加快,在通常應用時(shí),可以加快分析過(guò)程,同上保證高分辨率。根據沃特世色譜柱的要求設計,于濕法填充沃特世色譜柱,工作壓力可達25,000psi;可用于分析型、半制備、制備型沃特世
色譜柱的勻漿裝柱;壓力與流量均線(xiàn)性可調,可根據各種尺寸柱及粒徑填料的需求調節;
高壓泵接液部分與驅動(dòng)部分隔離,有效防止外界雜質(zhì)進(jìn)入高壓腔影響裝柱質(zhì)量;系統所用閥、高壓管、接頭等元件均為*,按相應的壓力等級選型,材質(zhì)為316不銹鋼,確保裝柱質(zhì)量及安全;包含支架方便沃特世色譜柱固定;根據不同的沃特世色譜柱和流動(dòng)相請選用相應規格的裝柱系統以保證更佳柱效;換裝不同的流動(dòng)相前請用足量的頂替液清洗;流動(dòng)相中所使用的各種溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水,建議使用0.45 μm濾膜過(guò)濾流動(dòng)相,除去微粒雜質(zhì);可跟據客戶(hù)要求配備各種規格的勻漿管和連接接頭。
在日常分離分析工作中,反相液相色譜柱的正確使用和維護十分重要,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會(huì )降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護色譜柱。
柱子在裝卸、更換時(shí),動(dòng)作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動(dòng),以免柱床產(chǎn)生空隙。如果儀器用來(lái)做常規分析,樣品種類(lèi)有限,但分析次數多,則不妨為每一類(lèi)常規分析配置一根柱,這樣有助于延長(cháng)柱子的壽命。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料,因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩。
應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然。如使用柱溫控制裝置時(shí),應注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。一般說(shuō)來(lái)反相液相色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。選擇使用適宜的流動(dòng)相,以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內,需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50-75mL。保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。反相液相色譜柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。安捷倫色譜柱在完成分離分析工作之后,不應立即停機,需及時(shí)對色譜分析系統進(jìn)行沖洗,一般0.5h以上,以除去色譜柱內的雜質(zhì)。