細胞培養中的那些問(wèn)題

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       做細胞培養的同學(xué)如果互相交流會(huì )發(fā)現，不同的實(shí)驗室有些規則是不一樣的，初學(xué)者經(jīng)常不知對錯，小編今天就和大家總結一下這些問(wèn)題，希望對你的細胞之路有所幫助。

購買(mǎi)之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì )發(fā)生細胞數目太少之情形？

研究人員在冷凍細胞之培養時(shí)出現細胞數目太少，大都是因為離心過(guò)程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長(cháng)隔夜后再更換培養基即可。

有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

細胞冷凍管解凍培養時(shí)，是否應馬上去除DMSO？ 

除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無(wú)法生長(cháng)或貼附之問(wèn)題。

DMSO之等級和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何？

冷凍保存使用之DMSO等級，必須為T(mén)issue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即為無(wú)菌狀況，第一次開(kāi)瓶后應立即少量分裝于無(wú)菌試管中，保存于4 C，避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機會(huì )。若要過(guò)濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。

可否使用與原先培養條件不同之培養基？

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞大都無(wú)法立即適應，造成細胞無(wú)法存活。

可否使用與原先培養條件不同之血清種類(lèi)？

不能。血清是細胞培養上一個(gè)極為重要的營(yíng)養來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對于細胞的生長(cháng)會(huì )產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會(huì )造成細胞無(wú)法存活。

培養基中是否須添加抗生素？

除于特殊篩選系統中外，一般正常培養狀態(tài)下，培養基中不應添加任何抗生素。

細胞冷凍培養基之成份為何？

動(dòng)物細胞冷凍保存時(shí)最常使用的冷凍培養基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原來(lái)細胞生長(cháng)用之新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì )放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。

細胞欲冷凍保存時(shí)，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？

冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial，融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。

 L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？

L-谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。

GlutaMAX-I是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩定？ 

GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解。

血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？

血清中沉淀物的出現有許多種原因，但的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì )存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。

為什么要熱滅活血清? 

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養ES細胞，昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

                                                                                                                                                    本篇轉載至實(shí)驗之家