影響安捷倫色譜柱使用壽的主要因素
更新更新時(shí)間：2019-06-12
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1.流動(dòng)相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無(wú)定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1，且在pH 1～9的范圍內溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響，對于硅膠基質(zhì)的填料，安捷倫色譜柱其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1～8。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用，使填料對流動(dòng)相的適應范圍大大增加，如現在廣泛使用的反相色譜填料C18 （十八烷基硅烷鍵合硅膠），其pH適用范圍可達2～10。當流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì )加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應均是不可逆反應，特別是在溫度較高（>40℃）的環(huán)境下，會(huì )使柱效迅速降低而報廢。
2.流動(dòng)相變質(zhì)
當前使用為廣泛的是硅基鍵合相填料，當以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí)，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì )滋生出一些細菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對于多元自動(dòng)比例混合的液相色譜儀來(lái)說(shuō)，水相或緩沖鹽相獨立存貯，因存放時(shí)間較長(cháng)而容易發(fā)生此類(lèi)問(wèn)題。
3.流動(dòng)相純度
目前，安捷倫色譜柱廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會(huì )有大量的流動(dòng)相通過(guò)，如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒，則很容易在柱頭部位被截留，久而久之，造成安捷倫色譜柱機械性堵塞，引起柱壓升高而無(wú)法正常使用。
4.其它因素
如，流動(dòng)相的極性對柱子也有一定影響，甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會(huì )破壞硅膠填料柱，正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會(huì )破壞化學(xué)鍵合硅膠柱，堿性溶液會(huì )破壞陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜柱，酸性溶液容易損壞陰離子交換樹(shù)脂柱。
樣品因素
1.樣品的溶解性
樣品試樣在配制中，如有少量微粒未能*溶解，則會(huì )隨試樣一起進(jìn)入色譜柱，同樣，會(huì )沉積在柱頭處，造成色譜柱的堵塞。
2.樣品的純度
樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì)，這些組分或雜質(zhì)可能會(huì )在柱內產(chǎn)生不可逆吸附，從而，使固定相的活性點(diǎn)被覆蓋，保留特性發(fā)生變化。
3.樣品的化學(xué)性質(zhì)
待測試樣中的各種組分與填料之間應具有化學(xué)穩定性，比較典型的是在使用氨基鍵合柱時(shí)，應避免使用含羰基的化合物和流動(dòng)相，如，丙酮、乙酸乙酯等，以免固定相中的NH2和酐、酮發(fā)發(fā)希夫（Schiff）縮合而使固定相破壞。
其它因素
影響安捷倫色譜柱壽命的因素很多，除流動(dòng)相和樣品因素外，還有其它一些外在因素，如，柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。
八大注意事項
1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此，在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩。
2.應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/div>
3.一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
4.選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
5.經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右。
?。ㄏ旅媪信e一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略用水沖洗這一步。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。）
6.保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。
7.色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1～2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5～30mm），可以起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。采用保護柱會(huì )損失一定的柱效，這是值得的。通常安捷倫色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH=2～9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著(zhù)在柱頂的填料上。
8.新的安捷倫色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補加填料使柱效恢復。每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如，ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4～5天開(kāi)機沖洗15分鐘。
